Essais phénotypiques
Large éventail d'essais phénotypiques pour quantifier et caractériser les changements cellulaires incluant viabilité, apoptose, migration et plus.
Les divers traitements infligés aux cellules en laboratoire soit par transfection ou par des drogues ont souvent des impacts phénotypiques plus ou moins importants, que ce soit au niveau de la prolifération, de la viabilité, de l'apoptose, une perturbation du cycle cellulaire et pour les cellules issues de lignées cancéreuses, un effet sur leur potentiel métastatique.
La plateforme RNomique met son expertise à votre disposition en offrant un éventail de services d'analyses phénotypiques de façon à quantifier et caractériser ces effets sur des cellules vivantes ou fixées.
Plusieurs appareils à notre disposition permettent de réaliser des essais de façon à visualiser les effets phénotypiques d'un traitement donné en continu (XCELLigence), par intervalles plus ou moins rapprochés (CloneSelect) ou à la fin d'une période déterminée (ImageXpress).
Nos analyses phénotypiques
Quantifiez et caractérisez les changements cellulaires grâce à notre vaste gamme d'analyses phénotypiques.
Imagerie à haut contenu
Essais d'imagerie par fluorescence en point final pour le comptage cellulaire, la viabilité, l'apoptose et l'analyse de prolifération.
Essais de prolifération / compte cellulaire
Les cellules sont ensemencées dans des plaques 96 puits puis traitées (transfection). Après la durée souhaitée du traitement, les cellules sont colorées au Hoechst (Invitrogen Corporation) puis des images sont acquises avec le microscope ImageXpress. Les cellules positives sont comptées et comparées aux cellules contrôles. Le Hoechst peut être utilisé en combinaison (multiplex) avec d'autres fluorophores.
Viabilité & Apoptose
La viabilité (ou perte de viabilité) des cellules est évaluée en utilisant du propidium iodide (PI) (Invitrogen Corporation) en combinaison avec Hoechst. Le Hoechst colore tous les noyaux cellulaires alors que le PI ne colore que les cellules mortes de nécrose ou en fin d'apoptose.
Le marqueur utilisé pour l'apoptose est l'Annexin-V Alexa fluor 647 (Invitrogen Corporation). Cette molécule détecte la translocation de phosphatidyl-sérine (PS) de la face interne de la membrane pour des cellules saines vers la surface externe des cellules apoptotiques.
Multiplex
En combinant les fluorophores ci-haut mentionnés, on peut faire tous ces essais à la fois sur les mêmes cellules, en une seule acquisition d'images au microscope.
BrdU (5-bromo-2′-désoxyuridine)
Cet essai permet de discriminer entre un phénotype de proliferation ou d'adhésion lorsqu'une réduction du compte cellulaire est observée.
Suivi en temps réel par impédance
Surveillance continue et sans marquage des cellules par technologie d'impédance — pour les courbes de croissance, la migration et l'invasion.
Alternativement, on peut utiliser l'appareil XCELLigence (ACEA) avec ses E-plates (16 puits/plaque) pour visualiser les courbes de croissance en temps réel de cellules traitées ou non sans fluorophore.
Essais de migration / invasion
À l'aide de l'appareil XCELLigence (ACEA) et de plaques CIM-plates, on peut visualiser la vitesse de migration ou d'invasion des cellules. Les CIM-plates sont des plaques de 16 puits composées de 3 parties (couvercle, chambre supérieure et chambre inférieure) fonctionnant comme des chambres de Boyden électroniques permettant de mesurer les mouvements cellulaires entre la chambre supérieure et la chambre inférieure pour chacun des 16 puits.
L'essai de migration utilise le sérum bovin fetal (FBS) comme chimioattractant. Les cellules ensemencées dans la chambre supérieure avec un milieu sans sérum vont migrer vers la chambre inférieure contenant le milieu supplémenté en sérum en traversant la membrane microporeuse équipée de biosenseurs.
L'essai d'invasion consiste essentiellement en un essai de migration à la différence qu'une couche de Matrigel recouvre la surface des puits de la chambre supérieure.
Analyse du cycle cellulaire
Profilage du cycle cellulaire par cytométrie en flux utilisant l'iodure de propidium sur des cellules fixées.
Essai de cycle cellulaire
L'analyse des phases du cycle cellulaire peut se faire en utilisant le propidium iodide (PI) sur des cellules fixées à l'éthanol. Après 30 minutes de coloration avec du PI 10mg/ml, les cellules sont passées au cytomètre de flux (FACS).
Pour plus d'informations
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